안녕하세요.
바이오앤드 입니다.
Cell counting 의 경우에는 어떤 분야까지 가능할까?
Cell을 확인하는 용도이기 때문에 생명공학의
실험실에서 사용되는 Cell line 정도에서 확인이
가능한 부분이라고 생각했습니다.
하지만, Cell Count의 분야도 다양하기 때문에
Yeast 와 같은 효모의 측정에도 R-300은 활용이
가능합니다.
보통은 Yeast Cell 을 확인하기 위해서
가장 많이 사용하는 방법이 OD600 측정입니다.
OD600 이란 무엇을 말할까요?
600nm 에서 배양액을 흡광값으로 확인하는
방법입니다. 자라난 배양액의 농도에 따라서
흡광되는 값의 정도를 비교하여 농도를 유추
해내는 방법을 600nm 구간에서 진행함을
의미합니다.
그렇다면 왜 ? 600nm에서 측정을 할까요 ?
그건 바로 Yeast 가 빛을 굴절 시키는 비율이
600nm 에서 가장 높기 때문입니다.
Absorbance 값이 높다는 의미는 그 파장의
빛을 가장 많이 그리고 가장 굴절이 많이
이루어진다는 뜻입니다. 600nm 의 빛을 가장
많이 튕겨내기 때문에 600nm에서 확인을 한다고
보시면 됩니다.
Absorbance 값 ↑ = 빛의 도달 양 ↓
반대의 의미로 보시면 됩니다.
즉, Yeast 의 양이 많아지면, 빛의 도달 양이 줄고
Absorbance 값이 올라가게 됩니다.
Yeast 의 세포수를 측정하는 방범에는
600nm 측정만 있을까요 ?
아닙니다.
세포수를 직접 카운팅하는 방법도 같이 사용합니다.
Yeast Cell 의 크기는...
Yeast Cell 의 종류에 따라 다라지기는 하지만
대략적으로 3μm ~ 10μm에 속하는 경우가
대부분 입니다.
그럼 쉽게 Cell Counter 를 이용해서 Cell 수를 확인이
가능하지 않을까요 ?
Cell Counter 로 Yeast 측정이 가능하다면...
3μm 이상의 세포의 확인이 완벽해야 합니다.
하지만, Yeast 관련 Test 를 많이 하시는 분들에게
알아보니 이게 생각처럼 쉽지 않다고 합니다.
그 이유는 무엇일 까요 ?
우선 세포의 크기가 작기 때문에 focus 문제가
발생 할 수 있습니다.
Brightfield Microscopy
광학현미경 기본의 Cell Counter 제품의 경우는
focus 잡는 과정이 반드시 필요합니다.
Auto focus 또는 수동 focus 작업이 필요합니다.
우리가 핸드폰을 사용해서 측정하고자 하는 사물의
위치에 따라서 focus 가 제대로 잡히지 않으면
흐릿 흐릿하게 사물이 찍히는 경우가 있듯이
focus out 이 되게 되면 원하는 세포가 제대로
측정이 되지 않을 수 있습니다.
Yeast 는 매우 크기가 작기 때문에 이런 문제가
발생할 확률이 높을 수 있습니다.
따라서, 초점이 잘 맞지 않아서 정확한 Cell Counting이
어려운 실정입니다.
그렇다면 대안은 어떤게 있을까요 ?
바로 디지털 홀로그래픽 현미경
Digital Holographic Microscopy (DHM 기술) 입니다.
Digital Holographic Microscopy
디지털 홀로그래픽 현미경
그럼 디지털 홀로그래픽 현미경을 사용하는 제품은
어떨까요 ?
카다로그를 확인하시면, Auto focus로 나오는 것은
동일합니다.
하지만 실제로 focus를 잡는 작업이 없습니다.
대부분의 사람들은 focus를 잡아야 이미지가 형성이
된다는 생각이 많기 때문에 Auto focus를 넣은 것
입니다.
즉, DHM 기술은 렌즈가 없기 때문에 어떠한 경우에서도
완벽한 이미지를 얻기 때문에 스펙상 Auto focus가
언제든지 완벽히 된다는 의미로 스펙에 넣은것 뿐입니다.
원리 자체가 디지털 홀로그래픽 현미경은
측정 공간의 체적면적내의 모든 세포들을 전부
측정을 한다고 보시면 됩니다.
2.3mm x 2.3mm
focus 의 경우에는 어떻게 focus가 잡히느냐에 따라서
이미지의 크기가 달라질 수 있습니다.
하지만, Digital Holographic Microscopy를
사용하는 fluidlab R-300 은 위의 공간에 있는
모든 3μm ~ 80μm 사이즈의 물질을 모두 감별이
가능하도록 이미지를 만들어 냅니다.
투영되어진 상의 이미지가 아니라 빛의 투과율로
이미지를 형상화하기 때문에 형성된 이미지는...
빛의 그림자로 보시면 됩니다.
LED 광원으로 빛을 쏘면
1차로 빛을 투과하여 물질의 존재 유무에 따라서
빛의 투과율이 달라지며...
Slide 에 세포나 물질이 존재한다면 카메라 센서에
도달하는 빛의 차이를 통해서 이미지를 형성합니다.
형성된 이미지는 한 번의 분석이 추가로 이루어져서
세포라고 인지된 것들은 boxed 처리가 이루어져
세포의 수로 환산하여 보여주게 됩니다.
결국 아무리 작은 세포라도 focus 를 잡지 않아도
되고 빛의 투과율로 인한 그림자를 센서가 모두 잡아
내기 때문에 Yeast 도 측정이 가능한 것 입니다.
fluidlab R-300 은
Cell count 범위 : 3μm ~ 80μm 입니다.
Viability 생존율범위 : 8μm ~ 80μm 입니다.
두 구간으로 나누어서 측정을 하는 이유는...
구간 내에 있는 세포의 이미지를 분석해야 하는데
분석 가능한 부분이 달라서 그렇습니다.
Cell Count의 경우에는 Cell 의 수를 세는 것만
확인하면 된다면...
Viability 생존율의 경우에는 살아있는 세포와
죽은 세포를 구분 할 수 있는 사이즈가 되어야 합니다.
그래서 Viability 의 경우에는 8μm 이상부터 가능합니다.
Yeast 측정을 하는 경우에는 Cell count
세포의 개수 확인을 하는 용도이기 때문에
문제없이 3μm 이상의 모든 세포를 확인 할 수
있습니다.
아래의 내용은 실제로 Yeast 를 측정한
사례입니다.
배양한 Yeast Cell 을 측정한 결과를 보시면 됩니다.
Test 1. 희석없이 바로 Yeast 측정
Test 2. 1/2 희석하여 Yest 측정
희석을 진행하고 안 하고에 따라서 세포의 수에
영향을 받는지 확인하는 방법으로 test를
진행하였습니다.
Test 1. 희석없이 바로 Yeast 측정
Yeast Cell 의 분포 : 4μm ~ 11μm
Yeast Cell : 3.01 x 10(6) cells/mL
희석없이 Yeast Cell을 측정한 결과
1ml 당 3.01 x 10(6) 개의 세포가 측정 되었습니다.
unboxed image (분석전 사진)
unboxed image는 2.3mm x 2.3mm 내에
존재하는 cell 의 세포를 측정한 사진입니다.
boxed image (분석 후 사진)
boxed image 는 측정한 사진을 분석을 통해서
Cell count에 포함된 사진을 확인한 방법으로
전체 촬영된 세포를 box 처리하여 확인하고
세포수를 확인합니다.
이렇게 2.3mm x 2.3mm 이내의 세포를
계산하여 1mL 내에 존재하는 Yeast cell의
total 양을 확인 할 수 있습니다.
측정된 결과값 : 3.01 x 10(6) cells/mL
Test 2. 1/2 희석하여 Yeast 측정
Test 1. 에서 측정한 Cell 을 1/2 로 희석을
진행하여 측정한 결과입니다.
약간 다르게 3μm 부터 측정된 결과를 확인
할 수 있지만, 전체적인 분포는 3μm ~ 11μm
사이에서 측정이 되는 것을 확인 할 수 있습니다.
Yeast Cell 분포는 3μm ~ 11μm
Yeast Cell : 1.58 x 10(6) cells/mL
unboxed image (분석 전 사진)
boxed image (분석 후 사진)
동일하게 unboxed image 와 boxed image를
분석해 본다면...
측정된 세포가 모두 정확하게 count 되는 것을
확인 할 수 있습니다.
측정된 결과값 : 1.58 x 10(6) cells/mL
Test 1. 희석없이 바로 Yest 측정한 확대사진
Test 2. 1/2 희석하여 Yeast 측정한 확대사진
위의 확대사진을 봐도 알 수 있듯이...
Yest cell 이 count 되는데 사용된 boxed 처리가
거의 모든 cell 에 처리가 정확히 진행 된 것을
확인 할 수 있습니다.
위의 확대사진을 통해서 이를 확인이 가능합니다.
fluidlab R-300 은...
Cell counter 의 새로운 개념의 기능을 사용합니다.
Digital Holographic Microscopy
디저털 홀로그래픽 현미경
그래서 더 정교하게 Cell 의 수를 빠짐없이 측정이
가능합니다.
검증을 위해서 앞에서 언급한데로
OD600 의 방법이 있습니다.
fluidlab R-300 은 Cell counter 기능도
있지만 당연히 Spectrometer 큐벳측정
기능도 있어서 바로 측정을 해 보았습니다.
fluidlab R-300 은 Spectrometer 기능까지
사용이 가능한 제품입니다.
측정결과 : 0.102 Abs
600nm만 확인도 가능하지만,
측정된 결과는 375nm ~ 700nm 의 다양한
범위의 파장에 대한 측정이 동시에 이루어
지기 때문에 만약 600nm 만이 아니라
다른 구간도 확인하고 싶다면 한 번의 측정으로
다른 파장의 값도 확인 할 수 있습니다.
그래서 측정 결과는 이렇습니다.
희석없이 측정 Cell count
3.02 x 10(6) cells/ml
OD600 : 0.102 Abs
1/2 희석측정 Cell count
1.58 x 10(6) cell/ml
희석을 진행해도 거의 정확한 dilution 값이
적용되는 것을 확인 할 수 있습니다.
그래서 fluidlab R-300 을 사용한다면 ?>?
1. Yeast Cell count : yes
2. OD600 : yes
두가지 측정 모두 사용이 가능합니다.
Adaptor 를 이용한다면....
Cell count 가능
Spectrometer 가능
모두 사용이 가능하기 때문에
굳이 2대의 장비를 별도로 구매하지 않고도
Yeast 의 측정을 매우 편리하게 사용이 가능합니다.
그리고 공간의 제약도 없습니다.
실험가운 주머니에 쏘옥~~
넣으면 충분합니다.
fluidlab R-300 은...
지금까지와는 다른 방식의 현미경을
사용하기 때문에 더 정교한 측정이
가능하고 고화질의 해상도를 제공합니다.
Cell counter + Spectrometer
작은 공간... 벤치 안... 현장 밖....
어디서나 한번 충전으로 전원없이
편리하게 사용이 가능합니다.
만약 제품에 대한 데모나 문의가 있으시면
언제든지 아래의 연락처나 이메일로 문의를
주시며 빠르게 답변드리겠습니다.
감사합니다 !!
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TEL : 02-2212-8800
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