Spectrophtometer 란??

생명공학에서 DNA, RNA, Protein을 모른다는 일이 있을 수 있을까요? 이러한 DNA, RNA, Protein의 양을 측정하고 수치화 할 수 있는 장비가 있습니다. 이것이 바로 Spectrophotometer(분광광도계)입니다.

 

 

일반적으로 빛은 물체를 통과하면서 고유의 피크파장대를 형성합니다. 옆의 그림처럼 DNA 같은 경우에는 260nm의 파장대에서 피크곡선을 그리며 빛을 냅니다. 이처럼 RNA도 동일한 260nm 에서 Protein은 280nm에서 피크곡선을 그리기 때문에 이 피크 곡선을 이용하여 Spectrophotometer로 측정을 합니다.    빛의 양은 Sample의 농도에 따라 달라지기 때문에 옆의 그림처럼 다양한 양으로 측정이 되어 농도를 분석할 수 있습니다. 이를 이용하여 실험에 필요한 DNA, RNA, Protein의 농도를 분석할 수 있습니다.

 

 

 

 

현재 시중에 판매되고 있는 제품은 Filter 방식과 Xenon Flash Lamp 방식으로 크게 두가지로 나뉩니다.

 

 

※ Filter

 

 

Filter 방식의 Spectrophtometer는 기존에 많이 사용을 하던 방식으로 DNA나 RNA 혹은 Protein을 Necleic Acid : Water or TE buffer (1:49 혹은 1:100 )등으로 희석하여 옆의 그림에서 보시듯 대부분 Cuvette에 넣어 측정을 하는 방식입니다. 이 방식은 옆에 보이는 그림 처럼 Cuvette에 빛을 쏘아 투과된 빛을 이용하여 260nm, 280nm등의 선택적인 Filter 장착하여 원하는 파장을 선택하여 측정을 할수 있는 방법입니다.  이 방법은 현재 많은 실험실에서 사용하고 있는 방식으로 장점은 저렴한 가격에 장비를 구매할수 있다는 것입니다. 하지만, 이 방식에는 Cuvette가 지속적으로 필요한 장비이며, Cuvette에 따라 Data 값이 달라질수 있다는 단점이 있이 있습니다.

 

 

 

※ Xenon Flash Lamp

 

 

 

Xenon Flash Lamp 이용한 Spectrophotometer는  Fliter를 이용한 것보다 최신에 개발되었습니다.

우선 Cuvette이 필요 없는 방법입니다. 옆의 그림과 같이 Sample을 희석없이 1ul의 양만으로 측정이 가능한데

소량의 Sample을 가지고 Sample의

간극을 일정하게 유지하여 직접 빛을 쏘아 측정을 하는 방법으로 간편하게 DNA, RNA, Protein등의 양을 측정할수 있습니다. 또한, Xenon Flash Lamp를 사용하는 장비는 장비를 사용하기위해 예열을 할 필요가 없기 때문에 Filter Type의 Spectrophotometer에서 필요한 Sample의 희석에 걸리는 시간과 예열시간 등에 소요되는 시간을 줄여 농도 측정에 필요한 시간을 대폭 줄일수 있다는 장점이 있습니다. 단점이라고 한다면 Filter type의 Spectrophotometer보다 제품의 가격이 높다는 것입니다.